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內毒素檢測時,血液前處理方法的注意點有哪些?

發(fā)布時間: 2022-12-07  點擊次數: 1070次

1、在進行血中內毒素測定時,要注意選擇方法和試劑。

 

2、血漿或血清制備

作為臨床上常用樣本主要為血漿,其使用率占95%以上,因此作為體液主要部分血漿的制備就顯得十分重要。據Das報道內毒素一般除了游離狀態(tài)外,還大量附著在血小板上,因此用含有大量血小板的血漿作為樣品更為合適。在制備人血漿或動物血漿時,目前國外為了防止細胞的破壞多采用低溫分離,使用含有大量血小板的血漿樣品,即在41000gx10分鐘分離條件,或在無低溫離心機時用3000gx40秒分離條件。切不可在常溫下進行高速、長時間分離另外,在分離血漿或血清時,要避免細菌的污染。

 

血清的制備用不加抗凝劑的注射器采血轉入離心管中,在冰水浴中放置30分鐘,4條件下、1000xg10分鐘進行離心分離血清。

 

血漿或血清分離后,若暫時不用,可在-80℃冰凍保存,并在1個月以內使用。注意為了避免吸附內毒素請使用玻璃制試管保存。

 

 

3、抗凝劑種類及影響

在制備血漿時由于加入一定的抗凝劑,因此抗凝劑的種類和加入量對于回收率都有很大的影響,一般常用抗凝劑主要有肝素,枸櫞酸鈉及EDTA,其中以肝素的使用最多。然而,我們知道大量的肝素會對內毒素反應有干擾作用,尤其對稀釋加熱法和氯仿提取法將使回收率下降,而對PCA法影響較少,因此在制備血漿時肝素的加放量只需2~5μl/ml即可。

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